疾病相關基因穩轉株構建

服務概述

　　穩轉株是指通過基因編輯獲得穩定過表達或抑制特定基因的細胞株。將疾病相關基因序列或抑制目的基因的shRNA序列裝載至重組載體，通過慢病毒篩選系統或轉座子篩選系統將目的基因的序列整合至宿主細胞的染色體中，實現目的基因持續、穩定的表達與調控。包括過表達穩轉株、敲低穩轉株和適應癥疾病基因穩轉株。

服務內容

　　采用慢病毒藥篩系統“慢病毒感染——藥物篩選法”or通過轉座子篩選系統進行穩轉細胞株的構建，包括構建過表達穩轉株、敲低穩轉株或疾病相關基因穩轉株。

服務流程

　　一、慢病毒篩選系統
　　1、目的基因篩選
　　生信篩選目的基因或選擇適應癥的靶點基因；
　　2、細胞株選擇
　　細胞株類型盡量選擇和所研究的適應癥一致，例如研究的適應癥為肝癌，可選擇相應的肝癌細胞系進行穩轉株構建，這樣構建的穩轉株細胞也可以用于下游的體內抗腫瘤活性評價實驗。通過QPCR和WB檢測細胞系基因表達，根據細胞系中基因表達情況，選擇需要構建穩轉目的基因的細胞株。
　　另外，如果做藥物與靶點之間的相互作用關系，可以選擇293T和CHO-K1這一類比較常用的工具細胞，這類細胞容易被慢病毒感染，因此容易獲得穩轉細胞，節省時間成本。
　　3、構建載體
　　將目的基因CDs區序列或抑制目的基因的shRNA序列裝載至重組載體；
　　4、慢病毒包裝質粒提取
　　5、病毒包裝
　　慢病毒質粒共轉到293T細胞中，通過慢病毒包裝系統進行病毒包裝；
　　6、病毒感染
　　設置不同梯度MOI，篩選最佳MOI；
　　7、抗性篩選
　　常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）、嘌呤霉素(puromycin)和G418遺傳霉素(Geneticin)?，針對序列不同抗性選擇不同的抗生素對細胞進行藥物篩選；
　　8、構建多克隆/單克隆穩轉株；
　　9、穩轉株表達驗證
　　10、交付實物
　　T25細胞瓶或凍存管，1到2*10^6個cells。
慢病毒篩選示意圖
　　二、轉座子篩選系統
　　1、目的基因篩選
　　生信篩選目的基因或選擇適應癥的靶點基因；
　　2、構建載體與質粒提取
　　3、轉座酶質粒和轉座序列質粒共轉
　　轉座酶質粒和轉座序列質粒共轉細胞；
　　4、抗生素篩選
　　常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）、嘌呤霉素(puromycin)和G418遺傳霉素(Geneticin)?，針對序列不同抗性選擇不同的抗生素進行藥物篩選；
　　5、單克隆
　　單克隆化擴增培養細胞；
　　6、檢測目的基因序列是否轉座進基因組
轉座子篩選示意圖

服務優勢

　　1、一站式服務
　　我司細胞庫有800株以上細胞株，資源種子齊全。提供產品全流程服務，省事省心；
　　2、技術成熟
　　通過“慢病毒感染——藥物篩選法”構建成功的穩轉株達500株以上，傳代后穩定表達；通過轉座子系統構建成功的穩轉株已用于多個層面研究；
　　3、多種穩轉株篩選系統可供選擇；
　　4、時間保證
　　從質粒構建到多克隆穩轉株交付，3-4個月；從質粒構建到單克隆穩轉株交付，4-6個月；
　　5、質量保障
　　保證細胞株無支原體衣原體感染；
　　6、提供專業技術指導
　　技術團隊平均技齡6年以上，提供專業培養技術指導；
　　7、售后無憂
　　2周無責售后，無后顧之憂。